患者對藥物的免疫反應(yīng)會導(dǎo)致藥物水平治療濃度下降，進而影響藥物的生物利用度。為了評估生物藥物或其活性成分的藥代動力學(xué)、藥效學(xué)及安全性，有必要對其免疫原性（Immunogenicity）進行評估與監(jiān)測。免疫原性分析是生物制劑臨床研發(fā)中的重要部分，臨床和非臨床研究通常是通過對藥物引起的抗藥物抗體(Anti-drug antibody, ADA)的檢測和確認來評估藥物的免疫原性。
因于免疫原性會嚴重影響藥物的有效性和安全性，藥監(jiān)部門要求所有生物治療性藥物都要進行免疫原性檢測，F(xiàn)DA對免疫原性的檢測給出的具體要求：高靈敏度、高特異性、高穩(wěn)定性及高親和力。ADA的檢測和確認比較復(fù)雜，檢測結(jié)果會受到所使用的分析方法的影響。目前評估免疫原性的方法學(xué)包括不同類型的免疫分析平臺：如傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA, 圖1a、b)、電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECL, 圖1c )和放射免疫分析（RIA, 圖1d），以及不同的ELISA檢測形式，如直接、間接、橋接和競爭ELISA等。
反義寡核苷酸（Antisense oligonucleotides , ASOs）是一種單鏈寡核苷酸分子，具有干擾mRNA和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)表達的性能，其比重組蛋白小得多，但仍能夠在患者體內(nèi)產(chǎn)生ADA，因此開發(fā)一種符合監(jiān)管部門要求的人類血液樣本中ADA的檢測方法往往具有挑戰(zhàn)性。近日，漢騰生物歐洲子公司FyoniBio的Hans Baumeister博士在TIDES USA 2022上分享了“Establishment of an assay to assess the immunogenicity of a therapeutic antisense oligonucleotide in clinical samples” （應(yīng)用臨床樣本建立和評估針對治療性ASO藥物的免疫原性檢測）的墻報，引起業(yè)內(nèi)公司的極大興趣。
FyoniBio基于Meso Scale Discovery (MSD) 的電化學(xué)發(fā)光（ECL）平臺檢測臨床樣品中的ADA。并分別對橋式和雙抗夾心ELISA形式進行檢測評估。在酸解預(yù)處理后，使用生物素化的ASO藥物作為捕獲試劑，然后將待檢樣本加到鏈霉親和素涂布的平板上，釕離子(sTAG)標(biāo)記的ASO藥物或檢測試劑A、B和C用于檢測（圖2）。
使用兔多抗對選定陽性對照組（PC）進行方法學(xué)優(yōu)化。結(jié)果顯示，與使用檢測試劑B或橋式ELISA相比，帶有檢測試劑C的雙抗夾心ELISA檢測結(jié)果最佳，抗ASO藥物抗體的檢測靈敏度為10 ng/mL，且該方法可耐受高達100 ng/mL的ASO血藥濃度（圖3）。
監(jiān)管機構(gòu)對臨床/臨床前樣品進行免疫原性分析的關(guān)注度越來越高，F(xiàn)DA已發(fā)布《治療性蛋白產(chǎn)品的免疫原性檢測——開發(fā)和驗證用于抗藥物抗體檢測的分析方法》指南，為在臨床試驗中評估治療性蛋白產(chǎn)品的免疫原性提供監(jiān)管指導(dǎo)，所以開發(fā)和建立可靠的免疫原性分析方法不僅為臨床免疫原性檢測提供早期指導(dǎo)，同時也能助力客戶加快推進藥物研發(fā)進程。 (更多信息，請點擊https://www.fyonibio.com/resource-center/guidelines/)