患者對(duì)藥物的免疫反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致藥物水平治療濃度下降，進(jìn)而影響藥物的生物利用度。為了評(píng)估生物藥物或其活性成分的藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)及安全性，有必要對(duì)其免疫原性（Immunogenicity）進(jìn)行評(píng)估與監(jiān)測(cè)。免疫原性分析是生物制劑臨床研發(fā)中的重要部分，臨床和非臨床研究通常是通過(guò)對(duì)藥物引起的抗藥物抗體(Anti-drug antibody, ADA)的檢測(cè)和確認(rèn)來(lái)評(píng)估藥物的免疫原性。
因于免疫原性會(huì)嚴(yán)重影響藥物的有效性和安全性，藥監(jiān)部門要求所有生物治療性藥物都要進(jìn)行免疫原性檢測(cè)，F(xiàn)DA對(duì)免疫原性的檢測(cè)給出的具體要求：高靈敏度、高特異性、高穩(wěn)定性及高親和力。ADA的檢測(cè)和確認(rèn)比較復(fù)雜，檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到所使用的分析方法的影響。目前評(píng)估免疫原性的方法學(xué)包括不同類型的免疫分析平臺(tái)：如傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA, 圖1a、b)、電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECL, 圖1c )和放射免疫分析（RIA, 圖1d），以及不同的ELISA檢測(cè)形式，如直接、間接、橋接和競(jìng)爭(zhēng)ELISA等。
反義寡核苷酸（Antisense oligonucleotides , ASOs）是一種單鏈寡核苷酸分子，具有干擾mRNA和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)表達(dá)的性能，其比重組蛋白小得多，但仍能夠在患者體內(nèi)產(chǎn)生ADA，因此開(kāi)發(fā)一種符合監(jiān)管部門要求的人類血液樣本中ADA的檢測(cè)方法往往具有挑戰(zhàn)性。近日，漢騰生物歐洲子公司FyoniBio的Hans Baumeister博士在TIDES USA 2022上分享了“Establishment of an assay to assess the immunogenicity of a therapeutic antisense oligonucleotide in clinical samples” （應(yīng)用臨床樣本建立和評(píng)估針對(duì)治療性ASO藥物的免疫原性檢測(cè)）的墻報(bào)，引起業(yè)內(nèi)公司的極大興趣。
FyoniBio基于Meso Scale Discovery (MSD) 的電化學(xué)發(fā)光（ECL）平臺(tái)檢測(cè)臨床樣品中的ADA。并分別對(duì)橋式和雙抗夾心ELISA形式進(jìn)行檢測(cè)評(píng)估。在酸解預(yù)處理后，使用生物素化的ASO藥物作為捕獲試劑，然后將待檢樣本加到鏈霉親和素涂布的平板上，釕離子(sTAG)標(biāo)記的ASO藥物或檢測(cè)試劑A、B和C用于檢測(cè)（圖2）。
使用兔多抗對(duì)選定陽(yáng)性對(duì)照組（PC）進(jìn)行方法學(xué)優(yōu)化。結(jié)果顯示，與使用檢測(cè)試劑B或橋式ELISA相比，帶有檢測(cè)試劑C的雙抗夾心ELISA檢測(cè)結(jié)果最佳，抗ASO藥物抗體的檢測(cè)靈敏度為10 ng/mL，且該方法可耐受高達(dá)100 ng/mL的ASO血藥濃度（圖3）。
監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)臨床/臨床前樣品進(jìn)行免疫原性分析的關(guān)注度越來(lái)越高，F(xiàn)DA已發(fā)布《治療性蛋白產(chǎn)品的免疫原性檢測(cè)——開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證用于抗藥物抗體檢測(cè)的分析方法》指南，為在臨床試驗(yàn)中評(píng)估治療性蛋白產(chǎn)品的免疫原性提供監(jiān)管指導(dǎo)，所以開(kāi)發(fā)和建立可靠的免疫原性分析方法不僅為臨床免疫原性檢測(cè)提供早期指導(dǎo)，同時(shí)也能助力客戶加快推進(jìn)藥物研發(fā)進(jìn)程。 (更多信息，請(qǐng)點(diǎn)擊https://www.fyonibio.com/resource-center/guidelines/)